亚洲欧美成人影院一区-亚洲av精品天堂在线-91人妻偷拍欧美亚洲-尤物视频网站在线播放

技術(shù)文章

Technical articles

當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章BD BiocoatTM 細(xì)胞檢測(cè)相關(guān)系統(tǒng)

BD BiocoatTM 細(xì)胞檢測(cè)相關(guān)系統(tǒng)

更新時(shí)間:2014-03-26點(diǎn)擊次數(shù):1598

BD BiocoatTM 細(xì)胞檢測(cè)相關(guān)系統(tǒng)

Biocoat腫瘤侵襲系統(tǒng)

BD 產(chǎn)品貨號(hào)354166, 354165

儲(chǔ)存和運(yùn)輸:-20度儲(chǔ)存,干冰運(yùn)輸。

使用指南:

BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統(tǒng)由包被Matrigel基質(zhì)的特殊材質(zhì)BD FluoroBlok 熒光屏蔽8.0μm PET膜的培養(yǎng)小室組合而成。BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統(tǒng)具有以下特點(diǎn):提高腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)的通量;自動(dòng)化非破壞式的熒光檢測(cè);節(jié)約抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物篩選的時(shí)間和勞動(dòng)力;高度可重復(fù)性:平均z’=0.7(24);平均z’=0.66(96);使用簡(jiǎn)便:無需反復(fù)取液和操作,僅需加入細(xì)胞、標(biāo)記物,然后直接讀板。

操作過程:

凍融

-20冰箱中取出產(chǎn)品,使其自然升溫到室溫。取出培養(yǎng)板在細(xì)胞小室內(nèi)加入到500μL 37預(yù)熱的PBS,37CO2環(huán)境下孵育2小時(shí)。解凍后,小心去除小室內(nèi)的培養(yǎng)基,避免破壞Matrigel基質(zhì)膜。

BD鈣黃綠素Calcein AM熒光染色劑后標(biāo)記法

細(xì)胞通過侵襲消化基質(zhì)膜后遷移到下小室,采用熒光標(biāo)記定量細(xì)胞。細(xì)胞的侵襲能力用終點(diǎn)計(jì)算法計(jì)算得到。對(duì)于采用實(shí)時(shí)動(dòng)力曲線的計(jì)算,推薦使用前標(biāo)記法。

2.1 如步驟1準(zhǔn)備培養(yǎng)板。

2.2 胰酶消化細(xì)胞單層后制得細(xì)胞懸液,溶于無血清DMEM培養(yǎng)基,推薦濃度為5×104 cells/mL。

2.3 上小室中加入500μL細(xì)胞懸液(2×104 cells)。

2.4 通過進(jìn)樣口在下小室中加入750μL誘導(dǎo)劑。

2.5 37,5%CO2 條件下孵育培養(yǎng)板和對(duì)照板20-22小時(shí)(由細(xì)胞類型決定)。

2.6 孵育后,小心去除上小室中的培養(yǎng)基。避免破壞Matrigel基質(zhì)膜??梢酝ㄟ^反扣住培養(yǎng)板,輕輕拍打,以使培養(yǎng)基的傾倒。

2.7 將培養(yǎng)小室轉(zhuǎn)移到另一塊24孔板中,該孔板含有0.5 mL每孔的4μg/mL 鈣黃綠素(溶于HBSS)。在375%CO2的環(huán)境下培養(yǎng)一小時(shí)。

3、DilC12(3)熒光染色劑預(yù)標(biāo)記法

細(xì)胞接種于孔板之前先用染色劑標(biāo)記,可用于均一化實(shí)驗(yàn),所產(chǎn)生的實(shí)時(shí)動(dòng)力數(shù)據(jù)可揭示細(xì)胞通過基底膜侵襲的動(dòng)力曲線,不需要分解和破壞各個(gè)時(shí)間點(diǎn)。

3.11.所示凍融。

3.2 10μg/mLDilC12(3)溶解于含10%FBSDMEM中,37 1小時(shí)標(biāo)記單層細(xì)胞。

3.3 胰酶消化細(xì)胞單層,制備細(xì)胞懸液,溶于無血清DMEM培養(yǎng)基,濃度為1×105 cells/mL

3.4 上小室加入500μL細(xì)胞懸液(5×104cells)。

3.5通過進(jìn)樣口在下小室加入750μL誘導(dǎo)劑。

3.6 37,5%CO2環(huán)境下孵育培養(yǎng)板和對(duì)照板18-24小時(shí)(由細(xì)胞類型決定)。在549激發(fā)波長(zhǎng)和565nm發(fā)射波長(zhǎng)條件下進(jìn)行熒光讀數(shù)。

4、數(shù)據(jù)計(jì)算

侵襲率%=受趨化劑誘導(dǎo)通過Matrigel基質(zhì)膜的細(xì)胞平均相對(duì)熒光值/受趨化劑誘導(dǎo)通過未包被FluoroBlok熒光膜的細(xì)胞平均相對(duì)熒光值×100

注意:數(shù)據(jù)可以用相對(duì)熒光值RFU或侵襲百分比表示,后者在標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)處理中更有用。背景扣除,計(jì)算平均背景值,將其從各個(gè)孔板中扣除。

 

自動(dòng)化操作注意事項(xiàng)

BD Falcon FluoroBlok 24孔板培養(yǎng)小室系統(tǒng)能適用于自動(dòng)化操作系統(tǒng)。蓋子可以用標(biāo)準(zhǔn)機(jī)械手取走,也可用吸力取走。為了避免各孔間污染,孔板設(shè)定為一個(gè)統(tǒng)一的方向。為了與培養(yǎng)小室匹配,確保Falcon的商標(biāo)均在2者上方,面向同一個(gè)方向。任何規(guī)格的槍頭都能達(dá)到小室的兩邊。包括50μL,100μL200μL,250μL,1000μL。


 

 

 

 

 

国产福利91在线视频| 日韩免费自拍偷拍视频| 日本一区二区三区麻豆| 日韩成人性生活免费网站| 一区二区三区亚洲免费版| 日日人人妻人人澡人人爽| 午夜亚洲精品无遮挡网站| 日韩一区二区三区视频在线观看视频| 精品在线观看视频一区二区| 夜夜偷天天爽夜夜爱| 亚洲成人一区在线播放| 日韩电影天堂在线播放| 亚洲二区欧美一区二区| 久久激情久久资源爱爱| 成人精品国产一区二区三区| 都市激情人妻另类内射| 四虎永久免费高清视频| 国产精品久久久懂色av| 成人黄色性生活视频| 激情一区二区三区成人| 九九热这里都是精品99| 五月天色婷婷丁香综合| 欧美自拍偷拍视频第一页| 亚洲欧美日韩在线观看一区二区三区| 一区二区三区熟女黄片| 欧美与日本特黄色一级| 国产午夜福利在线剧场| 寂寞人妻欲求不满中文字幕| 亚洲男人天堂一区日韩| 亚洲欧美日韩网友自拍| 内射中出亚洲骚人妻少妇| 日韩有码在线观看不卡| 熟女少妇内射日韩亚洲| 少妇高潮激情一区二区三区| 黄色av成人在线观看| 亚洲无人区码一二三四区| 欧美日韩国产亚洲乱码字幕| 青青草原免费网站在线观看| 亚洲一区二区三区四区中文| 午夜小视频免费在线看| 国产亚洲av一区二区三区在线|